cytoskeleton BK165-S說明書
簡單 全面的套件可大限度地縮短優(yōu)化時間,同時大化PTM檢測 質(zhì)量 的靈敏度和度,可以自信地識別低豐度的PTM 積分 使用相同的系統(tǒng)研究多個PTM
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量
10種檢測方法(Cat。#BK165-S)
Signal-Seeker™系列產(chǎn)品的開發(fā)旨在簡化專家和非專業(yè)人士對關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白修飾的分析。全面的Signal-Seeker™試劑盒提供親和珠系統(tǒng),可從任何給定的細胞或組織裂解液中分離和富集修飾的蛋白質(zhì)。然后使用針對靶蛋白的抗體通過標(biāo)準蛋白質(zhì)印跡程序分析富集的蛋白質(zhì)群體。
產(chǎn)品用途包括
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套件內(nèi)容
SUMOylation 1試劑盒包含以下組分:
裂解和蛋白質(zhì)定量步驟 | IP和預(yù)清除步驟 | 洗步驟 | 洗脫步驟 | 西部一步 |
BlastR™裂解緩沖液 BlastR™稀釋緩沖液 BlastR™過濾器 蛋白酶抑制劑雞尾酒 去SUMO化抑制劑雞尾酒 Precision Red™蛋白質(zhì)分析試劑 | SUMOylation 1 Affinity Beads IP控制珠
| BlastR™洗滌緩沖液
| 旋轉(zhuǎn)列 珠子洗脫緩沖液
| 化學(xué)發(fā)光試劑A. 化學(xué)發(fā)光試劑B. 抗SUMO1抗體
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示例結(jié)果
這些套件有很多應(yīng)用,這里我們描述一個有趣的例子:
應(yīng)用1:研究重要的SUMOylation 1事件
與舊的SUMO1工具相比,使用Signal-Seeker™SUMOylation 1檢測試劑盒免疫沉淀總SUMO1譜 (A)使用BlastR裂解和過濾系統(tǒng)獲得HAP1野生型(WT)或SUMO1敲除(KO)裂解物。將1mg每種裂解物與40mg每種SUMO1親和試劑一起溫育:ASM11-珠(Cytoskeleton),21C7(Invitrogen純化的),21C7(DSHB-上清液),D11-珠(Santa Cruz)和綴合的SUMO1 IgG對照珠。 (CIG03)。用蛋白G瓊脂糖珠捕獲21C7抗體以富集SUMO-1修飾的蛋白。通過SDS-PAGE分離樣品并轉(zhuǎn)移至PVDF。使用1:5000的ASM01(Cytoskeleton)抗體和5%牛奶中1:1000的小鼠Trubelot Ultra-HRP二抗,通過蛋白質(zhì)印跡分析富集的SUMO1樣品。Trueblot secondary用于小化21C7樣品的重鏈和輕鏈檢測。
(B):使用ASM11進行IP,如圖1A所示。SUMO1修飾的蛋白質(zhì)用ASM01 1:5000顯示,抗小鼠以1:20,000顯示,以突出在64-30kDa范圍內(nèi)SUMO化蛋白質(zhì)的分布,當(dāng)使用未綴合的抗體時,可能被重鏈和輕鏈干擾掩蓋。 IP。 |
與舊的SUMO1工具相比,使用Signal-Seeker™SUMOylation 1檢測試劑盒免疫沉淀SUMO1修飾的靶蛋白
使用BlastR裂解和過濾系統(tǒng)獲得HAP1野生型(WT)或SUMO1敲除(KO)裂解物。1毫克每裂解物與40孵育米 ASM11珠(細胞骨架),21C7(DSHB上清液),和共軛SUMO1 IgG對照珠(CIG03):g各自SUMO1親和試劑的。用蛋白G瓊脂糖珠捕獲21C7抗體以富集SUMO-1修飾的蛋白。通過SDS-PAGE分離樣品并轉(zhuǎn)移至PVDF。靶蛋白:通過蛋白質(zhì)印跡分析(A)TFII-I,RanGAP1和(B)schmd1的SUMO1修飾形式??雇?HRP標(biāo)記的第二抗體以1:10,000使用。所有三種一抗均為兔多克隆抗體,不應(yīng)結(jié)合來自IP抗體的重鏈和輕鏈片段。
在這一研究領(lǐng)域可以嘗試的其他實驗包括:
•參與調(diào)節(jié)靶蛋白的SUMOylating和去SUMOylating酶的藥理學(xué)研究。
•在各種不同的生長因子或藥物治療下研究SUMO化。
•檢查SUMOylated靶蛋白與其下游效應(yīng)子的相互作用。
•檢查SUMOylation 1和其他PTM之間對目標(biāo)蛋白的串?dāng)_。
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