qa-bio KE-EFX3說明書

Endo F多功能套件

Endo F Multi-Kit將在天然和變性條件下將N-連接的聚糖脫糖基化。每種酶對于N-連接的聚糖釋放具有不同的特異性?？梢赃x擇組合使用這三種酶以*去除糖蛋白或肽上存在的所有N-連接的聚糖，或獨立使用每種酶，從而確定存在的N-聚糖的類型。

零件編號：KE-EFX3

推薦使用Endo F Multi-kit來對在非變性條件下由于PN酶F裂解在蛋白質的三維結構中具有抗性的天然蛋白質進行去糖基化處理，因為已知這些酶對蛋白質構象的敏感性較低。

每一種酶的具有不同的N-連接的聚糖的特異性：
內切糖苷酶F1斷裂這樣的高甘露糖和某些雜合型N-聚糖
內切糖苷酶F2釋放雙觸角和高甘露糖聚糖（以40X減小的速率）
內切糖苷酶F3將釋放triantennarry和巖藻糖基雙觸角N-聚糖

應用：
–抗PNGase F裂解的天然蛋白質的去糖基化– 
聚糖類型的測定（高甘露糖，雙觸角，三/四臂觸角）
–脫糖基化時通常沉淀的去糖基化蛋白
– X射線晶體學

這三種酶在寡糖的核心中的兩個GlcNAc殘基之間切割天冬酰胺連接的（N-連接的）寡糖，產生截短的糖分子，其中一個N-乙酰氨基葡糖殘基保留在天冬酰胺上。

剩余的單糖會帶電荷，從而增加蛋白質的溶解度。相反，PNGase F可以完整清除寡糖。

使用說明

1.在Eppendorf管中加入多達200μg糖蛋白。用去離子水將終體積調整為34μl。
2.加入10μlEndo F2 / F3 5x反應緩沖液，250 mM乙酸鈉pH 4.5。如果單獨使用Endo F1酶，請使用Endo F1緩沖液，250 mM磷酸鈉pH 5.5。
4.將2.0μl每種酶添加到反應中。在37°C下孵育3小時。
通過SDS-PAGE監(jiān)控切割。

推薦使用Endo F Multi-kit來對在非變性條件下由于PN酶F裂解在蛋白質的三維結構中具有抗性的天然蛋白質進行去糖基化處理，因為已知這些酶對蛋白質構象的敏感性較低。

每一種酶的具有不同的N-連接的聚糖的特異性：
內切糖苷酶F1斷裂這樣的高甘露糖和某些雜合型N-聚糖
內切糖苷酶F2釋放雙觸角和高甘露糖聚糖（以40X減小的速率）
內切糖苷酶F3將釋放triantennarry和巖藻糖基雙觸角N-聚糖

應用：
–抗PNGase F裂解的天然蛋白質的去糖基化– 
聚糖類型的測定（高甘露糖，雙觸角，三/四臂觸角）
–脫糖基化時通常沉淀的去糖基化蛋白
– X射線晶體學

這三種酶在寡糖的核心中的兩個GlcNAc殘基之間切割天冬酰胺連接的（N-連接的）寡糖，產生截短的糖分子，其中一個N-乙酰氨基葡糖殘基保留在天冬酰胺上。

剩余的單糖會帶電荷，從而增加蛋白質的溶解度。相反，PNGase F可以完整清除寡糖。

使用說明

1.在Eppendorf管中加入多達200μg糖蛋白。用去離子水將終體積調整為34μl。
2.加入10μlEndo F2 / F3 5x反應緩沖液，250 mM乙酸鈉pH 4.5。如果單獨使用Endo F1酶，請使用Endo F1緩沖液，250 mM磷酸鈉pH 5.5。
4.將2.0μl每種酶添加到反應中。在37°C下孵育3小時。
通過SDS-PAGE監(jiān)控切割。