profoldin VRT100K簡介
病毒 RNA 依賴性 RNA 聚合酶試驗(yàn)是使用黃病毒科(陽性、單鏈、包膜 RNA 病毒家族)中的 RNA 聚合酶開發(fā)的。該測定法基于在存在 NTP 的情況下,以 RNA 為模板,測定由 RNA 聚合酶合成的 RNA 分子。該試驗(yàn)可在 384 孔或 96 孔板中進(jìn)行,用于檢測黃病毒科 RNA 聚合酶的酶活性和高通量篩選抑制劑。
病毒 RNA 依賴的 RNA 聚合酶檢測試劑盒-100(目錄號VRT100K)包括 350µl 10 x 緩沖液、33µl 100 x 模板、33µl 100 xNTP(50 mM ATP 和 50 mM GTP)和 330µl 10 x 熒光染料。用于 384 孔板中病毒 RNA 聚合酶的 100 次測定。檢測試劑盒包括除酶以外的所有試劑。
病毒 RNA 依賴的 RNA 聚合酶檢測試劑盒-500(目錄號VRT500K)包括 1550µl 10 x 緩沖液、160µl 100 x 模板、160µl 100 xNTP(50 mM ATP 和 50 mM GTP)和 1550µl 10 x 熒光染料。用于 384 孔板中病毒 RNA 聚合酶的 500 次測定。檢測試劑盒包括除酶以外的所有試劑。
Shu Yang 等人,Emetine 通過抑制病毒復(fù)制和減少病毒進(jìn)入兩種分子機(jī)制抑制寨卡和埃博拉病毒感染,Cell Discovery,第 4 卷,貨號:31,(2018 年 6 月 5 日)。
試驗(yàn)方案
以下試驗(yàn)方案基于 384 孔板試驗(yàn)格式(板類型:Matrix 4318 或類似)。反應(yīng)體積為 30 l,終測定體積為 60 l。對于 96 孔板測定(板類型:Costar 3915 或相似物),反應(yīng)體積為 60 l,終測定體積為 120 l。
1. 反應(yīng):
各反應(yīng)混合物的總體積為 30 l,包括 26.1 lH2O、3 l10 x 緩沖液、0.3 l100 x 模板、0.3 l100 xRNA 聚合酶和 0.3 l100 xNTP。將反應(yīng)混合物在 37 ℃ 下孵育 60 min。
用水稀釋 10x 熒光染料,制成 1x 染料。將 30 l1 x 染料與 30 l 反應(yīng)混合物混合。使用 485 nm 激發(fā)波長在 5 min 內(nèi)測量 535 nm 處的熒光強(qiáng)度。
該測定法可在測定窗口、測定法線性和對競爭性抑制劑的靈敏度方面進(jìn)行優(yōu)化。ProFoldin 提供 HTS 分析開發(fā)服務(wù)。
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