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Guanosine-3',5'-bisdiphosphate - (N-6001)

ppGpp, Magic Spot, Guanosine tetraphosphate

鳥苷3'，5'-雙二磷酸-（N-6001）

ppGpp，魔點，鳥苷四磷酸

->

描述

）特別地，ppGpp強烈抑制翻譯機制的成分如tRNA和rRNA的合成（Paul，BJ，et al。，Gralla，JD，et al。），同時刺激氨基酸生物合成相關基因的轉錄（ Artimovitch，I.等）。這種ppGpp介導的機制可防止不必要的能源外流，以幫助細菌生存直至達到足夠的氨基酸水平。ppGpp鳥苷四磷酸的合成是在嚴格的響應機制下由ATP和GDP合成的（圖1）。RelA和SpoT蛋白在維持適當?shù)膒pGpp水平中起著關鍵作用（綜述于（Potrykus，K.，et al。））。合成后，ppGpp轉錄因子與RNA聚合酶結合（Vrentas，CE等，）調節(jié)某些啟動子的轉錄，該過程在大腸桿菌中受蛋白質DksA輔助，圖2（Paul，BJ等）。在存在ppGpp的情況下，tRNA和rRNA的合成會減少，有利于氨基酸生物合成基因的轉錄。盡管人們了解了ppGpp的作用，但尚未*闡明ppGpp參與某些啟動子調控的機制，并且在不同細菌之間存在差異（Bernardo，LM等）。ppGpp的分子機制仍在研究中，以更好地發(fā)揮作用。通過嚴格的響應了解不同細菌如何適應環(huán)境。嚴格的響應盡管ppGpp在體內細胞存活中起著至關重要的作用，通過體外實驗，有幾個小組對我們目前有關四磷酸鳥苷如何與RNA聚合酶和其他轉錄因子相互作用的知識做出了貢獻（Lemke，JJ，Vrentas，CE，Powell，BS，deLivron，MA等）。著名的是，威斯康星大學的理查德·古斯（Richard Gourse）的實驗室致力于了解RNA轉錄調控以及ppGpp在調節(jié)對變化的環(huán)境條件的響應中所起的作用。Paul et al。（2003）描述了一種很好表征的轉錄測定法，以檢查添加的ppGpp濃度對體外轉錄過程中啟動子活性的影響。在本文中，我們提供了一些通用指導原則，可以在其中改變ppGpp數(shù)量以評估其對細胞嚴格反應的影響的任何體外轉錄測定中遵循。* Potrykus和Cashel指出，從大腸桿菌提取物中的放射自顯影照片中出現(xiàn)了兩個斑點，這些斑點與氨基酸饑餓的壓力有關。俄亥俄州立大學的伊琳娜·阿蒂西莫維奇（Irina Artsimovitch）稱，這些斑點被標記為“魔術”，因為“微生物學家半個世紀以來一直在想，這種結構相對簡單的小分子如何對調節(jié)細胞的存活產生如此深遠的影響。” 使用ppGpp進行體外轉錄測定的基本實驗參數(shù)：該測定法是研究ppGpp的細胞代謝方面的基本工具，這些方面對養(yǎng)分利用率的變化非常敏感，Schneider等人介紹了Gourse博士的基本方法之一。涉及制備將適當?shù)姆磻彌_液，DNA模板（超螺旋質粒或線性）結合的反應混合物，NTP的不平衡池（UTP的濃度非常低），以及存在或不存在ppGpp時感興趣的RNA聚合酶。然后將轉錄反應在適當?shù)臏囟群瓦m當?shù)臏囟认路跤?，使用EDTA和甲酰胺溶液淬滅，然后通過聚丙烯酰胺凝膠電泳進行分析，以確定轉錄產量。在Krásný和Gourse，Vrentras等人，Paul等人，Carmona等人和Bernardo等人中也描述了此協(xié)議的其他顯著變化。注意：應包括含有緩沖液而不是ppGpp的對照反應。注意：必須為每個特定的啟動子優(yōu)化鹽濃度（KCl或NaCl）。在高鹽濃度下，ppGpp的作用更為明顯（Potrykus，K.等）。” 我與之打交道的人一直都是專業(yè)人士，并且對產品有很好的工作知識。您提供的產品無法通過其他任何來源（ppGpp）獲得。我有一個小型實驗室，即使我們可以自己制作化合物，也不必專門找人制作化合物來加快我的研究工作。我認為你很棒---真的!!!“維多利亞·羅賓遜康涅狄格大學副教授

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