產(chǎn)品規(guī)格:
N-乙酰氨基葡萄糖苷酶從復雜的碳水化合物和糖蛋白上切割所有非還原性末端 β-連接的 N-乙酰氨基葡萄糖殘基。
GlcNAc 在雙、三和四觸角寡糖上的不同連接的切割率很大程度上取決于相鄰殘基的空間位阻。與 β(1-3) 連接的甘露糖連接的 β(1-2)GlcNAc 殘基以最高的速率被切割,而與 β(1-6) 連接的甘露糖連接的 β(1-2) GlcNAc 殘基在所有三種寡糖的低比率。β(1-6) GlcNAc 殘基,當存在時,以第二高的速率去除,而 β(1-4) GlcNAc,第三。在三天線結(jié)構(gòu)上,該殘留物以第二高的速率被去除。與 β 連接的甘露糖相連的一分為二的 β(1-4) GlcNAc 嚴重阻礙了其他 GlcNAc 殘基的裂解——裂解需要高濃度的酶和較長的孵育時間。
來源:重組從肺炎鏈球菌在大腸桿菌。
歐共體: 3.2.1.52
別名: β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶、N-乙?;?β-d-氨基葡萄糖苷、N-乙酰氨基葡萄糖苷水解酶、氨基葡萄糖苷酶、氨基己糖苷酶
內(nèi)容物:
N-乙酰氨基葡萄糖苷酶,溶于 20 mM Tris-HCl、25 mM NaCl,pH 7.5
5x 反應緩沖液 250 mM 磷酸鈉,pH 5.0
比活度: >80 U/mg
活度: >50 U/mL
分子量: ~140,000 道爾頓
pH范圍: 5-7,最佳5.0
建議用法:
1. 在試管中加入最多 100 µg 的糖蛋白或 1 nmole 的寡糖。
2. 用去離子水將最終體積調(diào)整為 14 µL。
3. 加入 4 µL 5x 反應緩沖液(pH 5.0)。
4. 加入 2 µL N-乙酰氨基葡萄糖苷酶。
5. 在 37°C 下孵育 3 小時。
注意:如果存在平分 GlcNAc 或 β(1-2)GlcNAc- α (1-6)Man,則將孵育國家時間增加到 18 小時。
特異性:切割所有非還原性末端 β-連接的 N-乙酰氨基葡糖。將 GlcNAc 一分為二會減慢反應速度。
比活性測定:定義為在 37°C、pH 5.0 條件下,從對硝基苯基-β-DN-乙酰氨基葡糖胺在 1 分鐘內(nèi)產(chǎn)生 1 µmole對硝基苯酚 ( p NP)所需的酶量
儲存:將酶儲存在 4°C。
純度:每批N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的污染蛋白酶測試如下;10 µg 變性 BSA 與 2 µL 酶一起孵育 24 小時。處理過的 BSA 的 SDS-PAGE 分析顯示沒有降解的跡象。
生產(chǎn)宿主菌株已經(jīng)過廣泛測試,不產(chǎn)生任何可檢測的糖苷酶。
穩(wěn)定性:如果儲存得當,至少可以穩(wěn)定 12 個月。暴露于環(huán)境溫度數(shù)天不會減少活動。