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高保真?高效率?高速PCR酶

KOD -Plus- Neo

用途

PCR

說(shuō)明

特征

●可對(duì)微量模板DNA進(jìn)行高保真?高效率的擴(kuò)增

通過(guò)應(yīng)用延伸增強(qiáng)劑技術(shù)，即便是微量模板DNA也可對(duì)目的基因進(jìn)行高保真?高效率的擴(kuò)增。同時(shí)本酶具備高保真性（約為T(mén)aq的80倍），可準(zhǔn)確地對(duì)低拷貝數(shù)模板的目的基因進(jìn)行擴(kuò)增。

※PCR錯(cuò)配率是通過(guò)使用各種酶以人基因組DNA為模板擴(kuò)增β-globin基因(2.4kb)，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行TA克隆后，對(duì)96個(gè)克隆進(jìn)行測(cè)序分析，測(cè)得的結(jié)果。

●縮短了延伸時(shí)間<30sec./kb>（長(zhǎng)目的片段更方便）

延伸時(shí)間從原產(chǎn)品的60sec./kb縮短到30sec./kb。對(duì)長(zhǎng)目的片段的擴(kuò)增更加方便。

●實(shí)現(xiàn)了各種引物同一循環(huán)條件

20mer以上的引物(Tm值>63℃)可先嘗試2步法。循環(huán)條件無(wú)需探討非常簡(jiǎn)便。（請(qǐng)參考基本反應(yīng)條件）
*Tm值采用最鄰近法(Nearest Neighbor method)計(jì)算得到的值。

●長(zhǎng)目的片段的擴(kuò)增
提高了延伸性，可對(duì)各種長(zhǎng)度的目的片段進(jìn)行擴(kuò)增。已通過(guò)實(shí)驗(yàn)確認(rèn)可對(duì)24kb的基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增。

●采用熱啟動(dòng)法，提高了PCR性能

原理

KOD DNA polymerase具有強(qiáng)有力的3’→5’核酸外切酶活性（校正活性），可準(zhǔn)確地對(duì)目的片段進(jìn)行擴(kuò)增，作為克隆用PCR酶獲得了廣泛的好評(píng)。 然而，高保真性PCR酶在20?30循環(huán)以后，容易出現(xiàn)擴(kuò)增無(wú)法持續(xù)的<停滯現(xiàn)象>。

實(shí)驗(yàn)例

1. Total RNA的各種基因全長(zhǎng)ORF的擴(kuò)增

以HeLa細(xì)胞來(lái)源的Total RNA逆轉(zhuǎn)錄后得到的cDNA（Total RNA 50 ng相當(dāng)）為模板， 對(duì)各種蛋白激酶的ORF（open reading frame）的全長(zhǎng)擴(kuò)增。反應(yīng)根據(jù)各PCR酶的推薦條件進(jìn)行了30個(gè)循環(huán)。結(jié)果可見(jiàn)，只有用KOD -Plus- Neo的情況下，所有的基因都能得到明亮的擴(kuò)增產(chǎn)物，所有的ORF都能迅速地進(jìn)行克隆。

2. β-globin基因上各種長(zhǎng)度區(qū)域的擴(kuò)增效率?延伸性的比較

以人基因組DNA（50ng）為模板，對(duì)各種長(zhǎng)度的β -globin 基因進(jìn)行擴(kuò)增。反應(yīng)按各PCR 酶的推薦條件，進(jìn)行了30個(gè)循環(huán)。結(jié)果顯示，只有用KOD -Plus- Neo 的情況下，17.5 kb 的片段能確認(rèn)得到明亮的條帶。 而且，17.5 kb 以下的片段，用KOD -Plus- Neo 的得率要高得多。

 參考文獻(xiàn)

1) M. Takagi et al., Appl. Environ. Microbiol., 63 : 4504-4510 (1997)

2) H. Hashimoto et al., J. Biochem.(Tokyo), 125 : 983-986 (1999)
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5) H. Hashimoto et al., J. Mol. Biol., 306 : 469-77 (2001)
6) T. Imanaka et al., J. Chin. Inst.Chem. Engrs., 32 : 277-288 (2001)

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(單獨(dú)銷(xiāo)售的組分)

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