消化法中常使用的酶有3種:胰蛋白酶、膠原酶I或Ⅱ以及透明質酸酶,透明質酸酶多與胰蛋白酶或膠原酶聯(lián)合應用; 膠原酶作用較緩和,能消化細胞間質中的膠原纖維以釋放細胞,對細胞損傷小,以膠原I為主。
胰蛋白酶(簡稱胰酶)是廣泛應用的消化劑.胰蛋白酶是一種胰臟制品,對蛋白質有水介作用,主要作用于賴氨酸或精氨酸相連接的肽鍵,使細胞間質中的蛋白質水介而使細胞分散開,在常用的蛋白酶中由于產品的活力和純度不同,對細胞的消化能力也不同,胰蛋白酶對細胞的作用,取決于細胞類型、酶的活力、配制的濃度、消化的溫度、無機鹽離子、pH以及消化時間的長短等. 胰蛋白酶作用較強,容易造成平滑肌細胞損壞;
膠原酶是一種從細菌中提取出來的酶,對膠原有很強的消化作用.適于消化纖維性組織、上皮組織以及癌組織,它對細胞間質有較好的消化作用,對細胞本身影響不大,可使細胞與膠原成分脫離而不受傷害.該酶分離效果好,即使有鈣、鎂離子存在仍有活性,故可用PBS和含血清的培養(yǎng)液配制,即操作簡便又可提高細胞成活率,zui終濃度200u/mL 此酶消化作用緩和,無需機械振蕩,但膠原酶價格較高,大量使用將增加實驗成本,所以選擇價廉物美的膠原酶是關鍵,所以不光要看重量還要看每MG的活性單位.
膠原酶的化學名為膠原蛋白水解酶(Collagenase),它能在生理PH和溫度條件下特異性地水解天然膠原蛋白的三維螺旋結構,而不損傷其它蛋白質和組織。膠原酶的化學本質是一種蛋白質,因此,這對溫度、PH和導致蛋白質變性的各種因素均非常敏感,極易受到外界條件的影響而改變其本身的構象和性質。
膠原酶(collagenase)是從溶組織梭狀細胞芽孢桿菌提取制備的,主要水解結締組織中膠原蛋白成分。當擬消化的組織較硬,內含較多結締組織或膠原成分時,用胰蛋白酶解離細胞的效果較差,這時可采用膠原酶解離細胞法。 膠原酶僅對細胞間質有消化作用而對上皮細胞影響不大。因此適于消化分離纖維性組織、上皮及癌組織,可使上皮細胞與膠原成分分離而不受損害。常用劑量為zui終濃度200U/ml。膠原酶分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝細胞膠原酶,要根據所要分離消化的組織類型選擇膠原酶類型。
中文名稱: I型膠原酶、II型膠原酶、IV型膠原酶、V型膠原酶
英文名稱:Collagenase I、Collagenase II、Collagenase IV、Collagenase V
CAS號: 9001-12-1
規(guī)格:100mg, 1g ,5
產地:Worthington sigma invitrogen
外觀: 棕色或棕褐色結晶狀凍干粉;
保存:-20°C
膠原酶配制方法和胰蛋白酶的配制方法一致,只是要注意標簽中的活性單位,zui終配制 成為200u/mL就可以了.,
胰蛋白酶的配制、過濾除菌與分裝過程
準備樣品:干粉,PBS緩沖液,離心管兩個、凍存管20個、盒子一個、槍頭1盒、滅菌器、注射器。
準備工作:將離心管、凍存管裝載盒子中高溫高壓滅菌。
配制:
1.稱取胰蛋白酶:按胰蛋白酶液濃度0.25%用電子天平準確稱取粉劑50mg溶入離心管PBS(PH到7.2左右)液中。攪拌混勻,置于4℃內12小時。
2.用注射濾器抽濾消毒:配好的胰酶溶液要在超凈臺內用注射濾器(0.22微米微孔濾膜)抽濾除菌。
3.分裝:將除菌之后的胰蛋白酶用移液槍分裝至
A: Collagenase I(膠原酶I型) : 主要用于上皮、肺、脂肪和腎上腺組織細胞的分離。
訂貨信息
貨號 | 品名 | 包裝 | 價格 | 品牌 |
LS004194 | Collagenase I(膠原酶I型) | 100 mg | 476 | Worthington |
LS004196 | Collagenase I(膠原酶I型) | 1 gm | 2464 | Worthington |
LS004197 | Collagenase I(膠原酶I型) | 5 gm | 10360 | Worthington |
17100-017 | Collagenase I(膠原酶I型) | 1g | 3025 | invitrogen |
C0130-100MG | Collagenase I(膠原酶I型) | 100mg | 526.5 | sigma |
C0130-500MG | Collagenase I(膠原酶I型) | 500MG | 1473.03 | sigma |
C0130-1G | Collagenase I(膠原酶I型) | 1G | 2208.96 | sigma |
C0130-5G | Collagenase I(膠原酶I型) | 5G | 6113.25 | sigma |
B: Collagenase II(膠原酶II型) : 適用于肝臟,骨,甲狀腺,心臟和唾液腺組織細胞的分離。
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貨號 | 品名 | 包裝 | 價格 | 品牌 |
LS004177 | Collagenase II(膠原酶II型) | 5 gm | 10360 | Worthington |
LS004176 | Collagenase II(膠原酶II型) | 1 gm | 2464 | Worthington |
LS004174 | Collagenase II(膠原酶II型) | 100 mg | 476 | Worthington |
17101-015 | Collagenase II(膠原酶II型) | 1g | 3025 | invitrogen |
C6885-25MG | Collagenase II(膠原酶II型) | 25MG | 508.95 | sigma |
C6885-100MG | Collagenase II(膠原酶II型) | 100mg | 778.05 | sigma |
C6885-500MG | Collagenase II(膠原酶II型) | 500MG | 1,980.81 | sigma |
C6885-1G | Collagenase II(膠原酶II型) | 1G | 2,971.80 | sigma |
C6885-5G | Collagenase II(膠原酶II型) | 5G | 7,926.75 | sigma |
C: Collagenase III(膠原酶 III型) 對哺乳動物的組織有廣譜的消化作用
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貨號 | 品名 | 包裝 | 價格 | 品牌 |
LS004182 | Collagenase III(膠原酶 III型) | 1 gm | 2464 | Worthington |
LS004183 | Collagenase III(膠原酶III型) | 5 gm | 10360 | Worthington |
LS004180 | Collagenase III(膠原酶III型) | 100 mg | 476 | Worthington |
D: Collagenase IV(膠原酶IV型):膠原酶Ⅳ包含至少7中蛋白酶成分,分子量從68-130KD不等。它能消化多種組織, 對哺乳動物的組織有廣譜的消化作用。
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貨號 | 品名 | 包裝 | 價格 | 品牌 |
17104-019 | Collagenase IV(膠原酶IV型) | 1g | 3025 | invitrogen |
C5138-25MG | Collagenase IV(膠原酶IV型) | 25MG | 452.79 | sigma |
C5138-100MG | Collagenase IV(膠原酶IV型) | 100mg | 772.20 | sigma |
C5138-500MG | Collagenase IV(膠原酶IV型) | 500MG | 2,530.71 | sigma |
C5138-1G | Collagenase IV(膠原酶IV型) | 1G | 4,095.00 | sigma |
C5138-5G | Collagenase IV(膠原酶IV型) | 5G | 15,420.60 | sigma |
LS004189 | Collagenase IV(膠原酶V型) | 5 gm | 10360 | Worthington |
LS004188 | Collagenase IV(膠原酶V型) | 1 gm | 2464 | Worthington |
LS004186 | Collagenase IV(膠原酶V型) | 100 mg | 476 | Worthington |
E: Collagenase V(膠原酶V型): 膠原酶Ⅴ包含至少7中蛋白酶成分,分子量從68-130KD不等。它可用于胰腺小島組織的分離,結締組織分離。
貨號 | 品名 | 包裝 | 價格 | 品牌 |
LS005283 | Collagenase V(膠原酶V型) | 5 gm | 12460 | Worthington |
LS005282 | Collagenase V(膠原酶V型) | 1 gm | 2968 | Worthington |
LS005280 | Collagenase V(膠原酶V型) | 100 mg | 588 | Worthington |
C9263-25MG | Collagenase V(膠原酶V型) | 25MG | 469.17 | sigma |
C9263-100MG | Collagenase V(膠原酶V型) | 100mg | 625.95 | sigma |
C9263-500MG | Collagenase V(膠原酶V型) | 500MG | 1,814.67 | sigma |
C9263-1G | Collagenase V(膠原酶V型) | 1G | 2,845.44 | sigma |
C9263-5G | Collagenase V(膠原酶V型) | 5G | 5,686.20 | sigma |
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